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诱导多功能干细胞实验

产品简介

iPS干细胞的出现，在干细胞研究领域、表观遗传学研究领域以及生物医学研究领域都引起了强烈的反响，这不仅是因为它在基础研究方面的重要性，更是因为它为人们带来的光明的应用前景。
诱导多功能干细胞实验是常见细胞实验之一。

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更新时间：2026-03-20
厂商性质：代理商
访问量：2000
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阶段1：实验设计与准备

  • 目标设定：明确研究目的（疾病建模、药物筛选、机制研究、细胞治疗前探索）。


  • 体细胞选择：根据易获取性、增殖能力、遗传背景、表观遗传状态选择（常用：皮肤成纤维细胞、外周血单个核细胞、尿液上皮细胞）。


  • 重编程因子选择：


    • 经典Yamanaka因子：OCT4, SOX2, KLF4, c-MYC （OSKM）。


    • 其他组合：OCT4, SOX2, NANOG, LIN28 等。


  • 重编程方法选择（关键决策点，见第二部分详述）。


阶段2：体细胞培养与准备

  • 原代细胞提取、培养扩增，确保细胞状态良好、无污染。


阶段3：重编程诱导

  • 将重编程因子导入体细胞。


  • 将转导后的细胞以合适的密度接种在滋养层细胞（如小鼠胚胎成纤维细胞，MEFs）或包被了基质胶（Matrigel）/玻连蛋白的培养皿上。


  • 使用iPSC培养基（如mTeSR， Essential 8）进行培养，定期换液。


阶段4：iPSC克隆的识别、挑取与扩增

  • 识别：约2-4周后，出现类似人胚胎干细胞的、边界清晰、核质比高的克隆。


  • 挑取：在显微镜下用枪头或克隆环机械挑取单个克隆。


  • 扩增：将克隆打散成小团块，传代至新的培养板中，逐步扩大培养。


阶段5：iPSC系的鉴定与建系
这是验证实验成功与否的核心，需多维度验证：

  1. 形态学：典型的ESC样克隆形态。


  2. 多能性标志物表达：


    • 免疫荧光/流式细胞术：检测OCT4, SOX2, NANOG, SSEA-3/4, TRA-1-60/81等蛋白表达。


    • qRT-PCR：检测内源性多能性基因的mRNA表达水平。


  3. 表观遗传状态：检测多能性基因启动子区（如OCT4, NANOG）去甲基化状态。


  4. 分化潜能（功能验证准）：


    • 体外拟胚体形成：验证其自发分化为三个胚层（内、中、外胚层）细胞的能力。


    • 体内畸胎瘤实验：将iPSC注射到免疫缺陷小鼠体内，形成包含三胚层组织的畸胎瘤。


  5. 核型分析：确保在重编程和扩增过程中未发生染色体异常。


  6. STR指纹鉴定：验证iPSC与来源体细胞的遗传一致性，排除交叉污染。


阶段6：iPSC的维持、保藏与后续分化

  • 维持培养：在无滋养层条件下，使用确定成分的培养基进行传代培养。


  • 冷冻保藏：建立主细胞库和工作细胞库。


  • 定向分化：根据研究目标，将iPSC分化为特定细胞类型（如神经元、心肌细胞、肝细胞）。





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