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心肌细胞的原代培养

更新时间:2024-03-05点击次数:368


1. 准备0-1天内的SD大鼠新生鼠。

2. 用温的无菌去离子水,轻轻擦拭每只新生鼠。

3. 70%的乙醇去除新生鼠身体上的污染物。

4. 断头,取心脏,心脏置于冰的PBSG溶液中。

5. 除去血液和非心脏组织。

6. 剪碎心脏组织。

7. 加入胰酶-胶原酶消化液,每只新生鼠75ul

8. 37°C的摇床培养箱中,以250 rpm/ 5 min,消化心肌组织

9. 轻轻涡旋,然后离心10秒,丢弃第一次消化的上清液。

10. 开始第二次消化,250 rpm/ 5 min轻轻涡旋,然后离心10秒,收集含心肌细胞的上清液到2倍体积的马血清中。

11. 重复上述心肌细胞的消化过程,共进行10次消化,收集心肌细胞悬液。

12. 使用没有包被的10cm大皿,预种植心肌细胞1h

13. 1h后,收集没有贴壁的心肌细胞,200g/10min 离心,

14. 重悬心肌细胞于DMEM培养基中,种植在包被过的培养皿中。