心肌缺血模型

心肌缺血模型是研究冠心病、心肌梗死及药物干预机制的核心工具。根据最新文献及实验技术，以下是目前主流的模型构建方法及验证体系的整合分析：

一、动物选择与品系

1. 常用动物：

• 大鼠：SD（Sprague-Dawley）或Wistar品系，雄性，体重200-300g（年龄6-8周），因其心脏解剖结构与人类相似且耐受性强。

• 小鼠：C57BL/6、BALB/C品系，用于基因修饰或小样本研究。

2. 品系差异：SD大鼠对缺血损伤更敏感，Wistar大鼠适用于慢性模型研究。

二、构建方法

（一）冠状动脉结扎法

1. 手术步骤：

• 麻醉：腹腔注射戊ba比妥钠（30-40 mg/kg）或氨基甲酸乙酯（1,000 mg/kg）。

• 开胸与暴露心脏：剃毛消毒后，剪开左胸第3-4肋间隙，钝性分离肌肉，撕开心包膜，暴露左冠状动脉前降支（LAD）。

• 结扎位置：左心耳下缘2 mm处，使用6-0缝合线结扎LAD，造成左心室前壁缺血。

• 假手术组：仅穿线不结扎，作为对照。

2. 辅助技术：

• 线栓法：使用可逆线栓控制缺血时间（如缺血30分钟后拔栓再灌注），适用于缺血再灌注模型。

• 血流阻断验证：术中用激光多普勒监测冠状动脉血流，确保阻断。
  

（二）药物诱导法

1. 垂体后叶素注射：

• 舌下静脉注射垂体后叶素（2.0 IU/kg），通过血管痉挛诱导急性心肌缺血，以T波变化和心率降低为指标。

2. 异丙肾上腺素联合高脂饮食：

• 高脂饲料配方：87.3%基础饲料 +10%猪油 +2%胆固醇 +0.5%牛磺酸钠 +0.2%丙基硫氧嘧啶，喂养6周后腹腔注射盐酸异丙肾上腺素（5 mg/kg/d×3天），显著升高血清总胆固醇并诱导心肌损伤。

（三）离体心脏模型

• Langendorff离体灌注：离体心脏以缓冲液灌注，局部缺血15-30分钟后复灌，通过CK、LDH释放量及TTC染色评估损伤。

三、模型验证指标

1. 心电图监测：

• ST段抬高≥0.1 mV或T波倒置为急性缺血标志。

• 心率变化：缺血后心率下降≥20%视为有效。

2. 生化指标：

• 心肌酶谱：LDH（乳酸脱氢酶）、CK-MB（肌酸激酶同工酶）显著升高，提示心肌细胞坏死。

3. 病理学验证：

• TTC染色：正常心肌呈砖红色，缺血区灰白色，梗死面积≥30%为模型成功。

• 组织切片：HE染色显示心肌细胞空泡变性、炎性浸润；Masson染色显示胶原纤维增生。

4. 血流动力学检测：

• 左心室收缩压（LVSP）降低、左心室舒张末压（LVEDP）升高，提示心功能不全。

四、关键参数优化

1. 缺血时间：

• 大鼠：单纯缺血30分钟可致稳定损伤，再灌注120分钟为观察再灌注损伤的最佳窗口。

• 小鼠：缺血时间需缩短至15-20分钟以避免高死亡率。

2. 死亡率控制：

• 结扎术后10周内死亡率约25%，需排除心梗面积<30%的个体以减少假阳性。

五、注意事项与伦理规范

1. 术后护理：

• 术后恒温箱复苏，避免低体温；补充电解质及抗生素预防感染。

2. 伦理审批：

• 所有实验需经伦理委员会批准（如研伦审第(2019)85号）。

3. 品系特异性：

• SD大鼠对异丙肾上腺素更敏感，Wistar大鼠适合长期高脂饮食研究。

总结与展望

心肌缺血模型的构建需根据研究目的选择合适方法：

• 基础机制研究：推荐冠状动脉结扎法，操作直观且病理变化明确。

• 药物筛选：药物诱导法（如垂体后叶素或异丙肾上腺素）可快速成模，适用于高通量实验。

• 基因与代谢研究：结合高脂饮食与基因修饰动物（如Alox15−/−小鼠）可深入探讨脂代谢与缺血损伤的关联。