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细胞增殖到底用MTT还是CCK8呢?

更新时间:2017-11-30点击次数:9665

MTT增殖曲线,基本上就是基础的功能实验了,养过细胞的你应该都会做。

但是,要怎么样才能省时省力呢?你也知道,如果用MTT的话,加入10ul的MTT后要等四个小时,在活细胞的线粒体中形成甲囋,然后在把培养基吸掉,再加上DMSO溶解,进行检测。

这个方法是常用的MTT方法,但是会有三个问题,*个是有的甲囋不容易溶解。

还有一个问题就是,由于要让DMSO充分溶解甲囋,所以会要混匀,就会产生泡沫,影响酶标仪读值:

第三个问题,就是在吸去培养基的时候,容易把甲囋也吸走,导致终读值不准。

当然也不是没有办法的,这篇文献中提到在DMSO中加入8到800mM的氨的碱性DMSO能更快更好地溶解甲囋:

当然,这个也是有人亲测可用的。不过,我们还是来谈谈另一种溶剂哈,就是传说中的三联液,这个其实是1983年Mosmann大神*次发明MTT法时所采用的溶解液:

初的版本是酸化异丙醇,也就是加入了0.04N的盐酸的异丙醇。但是后来又衍生成为了:SDS10g,异丁醇5ml,0.1ml的10M HCl,用双蒸水溶解配成100ml溶液,这就是三联液。

三联液的优点在于不用吸去培养基,当然,缺点就是要溶解很久。不过加完三联液后可以过夜,第二天再测。

还有一种检测方法也很常见,就是CCK8,和MTT的区别就在于……贵。比如MTT要5分钱,CCK8差不多就5毛……还有一点就是,CCK8会形成水溶性的橙色甲囋,MTT形成的是紫色的有机溶剂溶解的甲囋。

所以CCK8加入后,就直接等4小时左右,让橙色甲囋溶解到培养基就能检测了。而MTT,就需要用DMSO再溶解出来……