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流式细胞术双标实验

产品简介

流式细胞术双标实验流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、性好的优点，是当代的细胞定量分析技术之一。
流式细胞术（双标）实验是常见细胞实验。

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更新时间：2026-03-20
厂商性质：代理商
访问量：2472
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步：实验设计

  • 确定目标抗原：明确要检测的两个蛋白（如CD3和CD4）。


  • 选择抗体荧光染料：


    • FITC 和 PE：经典组合，价格实惠，仪器兼容性好。但需注意补偿。


    • PE 和 APC：亮度都很高，是区分关键亚群的组合。


    • 原则：两个染料的激发光和发射光谱应尽量分开，光谱重叠越小越好。


    • 经典高性价比搭配：


    • 注意：避免使用发射光谱过度重叠的染料组合，如FITC和PE-Cy5（在传统配置上可能相互干扰）。


第二步：样本制备

  • 制备高质量的单细胞悬液。


  • 细胞计数，调整细胞浓度至约1×10^7 cells/mL。


第三步：荧光标记（染色）
这是核心操作，顺序和条件至关重要。

  1. 封闭：加入Fc受体阻断剂（如抗CD16/32抗体或人/鼠血清），冰上孵育10-15分钟，减少非特异性结合。


  2. 抗体染色：


    • 直接法（）：将两种不同荧光标记的抗体（如Anti-CD3-FITC 和 Anti-CD4-PE）按工作浓度混合，加入细胞中。


    • 间接法（较少用）：先加未标记一抗，洗涤后，再用两种不同荧光标记的二抗（分别针对两种一抗的种属）进行标记。此法步骤多，背景可能较高。


  3. 孵育与洗涤：


    • 混匀后，避光、4°C孵育20-30分钟。


    • 加入预冷的染色缓冲液（含2% FBS的PBS），离心洗涤1-2次，去除未结合的游离抗体。


  4. 上机前处理：用适量的染色缓冲量重悬细胞，过筛网后置于流式上样管中。如需区分死细胞，可在此时加入死活染料（如7-AAD、PI、DAPI），注意死活染料需与抗体荧光通道兼容。





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