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流式细胞术单标实验

产品简介

流式细胞术单标实验流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、性好的优点，是当代的细胞定量分析技术之一。
流式细胞术（单标）实验是常见实验之一。

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更新时间：2026-03-20
厂商性质：代理商
访问量：2494
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步：实验设计与准备

  • 确定靶标分子：明确要检测的蛋白（如CD4， CD19， CD34等）。


  • 选择抗体与荧光染料：


    • 高表达抗原：可选择多种染料（FITC， PE， APC等）。


    • 低/弱表达抗原：必须选择高亮度染料，如PE， APC， Brilliant Violet 421，以获得更好的信噪比。


    • 抗体特异性：选择经过验证的、适用于流式检测的抗体。


    • 荧光染料选择：根据目标分子的表达丰度和仪器配置选择：


  • 设计对照组：这是数据可信度的生命线（详见下文）。


第二步：样本制备与染色

  1. 制备单细胞悬液：确保细胞分散良好，无团块，活性高。


  2. 细胞计数与分装：将细胞分装至流式检测管（如1.5 mL EP管或流式管），通常每管约1-5×10^5个细胞。


  3. 封闭：加入Fc受体阻断剂或血清，冰上孵育10-15分钟，减少非特异性吸附。


  4. 抗体染色：


    • 直接法：加入适量体积的荧光标记抗体（关键步骤：需预行抗体滴定确定用量）。轻轻混匀。


    • 间接法：先加未标记一抗，孵育洗涤后，再加荧光标记的二抗（现在较少用，多色时代多用直接法）。


  5. 孵育与洗涤：


    • 避光、4°C孵育20-30分钟。


    • 加入过量预冷染色缓冲液（如2 mL），离心（如300-400g， 5分钟，4°C）。


    • 小心弃上清（可留约50μL液体，防止吸走细胞沉淀），弹散细胞。此步骤可重复一次以确保洗去游离抗体。


  6. 重悬与上机：用适量体积（如300-500μL）的染色缓冲液重悬细胞，过筛网后置于流式管中，尽快上机检测。若需区分死细胞，可在一步加入死活染料。





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