子宫内膜异位症模型构建

一、建模方法分类

1. 自体移植模型（主流方法）

基于"经血逆流种植学说"，通过手术将自体子宫组织移植至腹腔或特定部位诱导异位生长。

• 经典操作步骤：

1. 动物选择：雌性未交配SD或Wistar大鼠（180-270g），动情周期规律。

2. 术前处理：皮下注射苯甲酸雌二醇（30-150 μg/kg）以促进子宫内膜增殖。

3. 组织获取：麻醉后开腹切除1-1.5cm子宫角，纵行剖开并修剪成5×5mm内膜片。

4. 移植部位：

• 腹壁肌肉层（血管丰富区，成功率>80%）

• 卵巢附近或子宫骶韧带（模拟盆腔EMT）
  5. 固定方式：无损伤缝线将内膜面朝向腹腔缝合，保留肌层以促进血管生成。

• 术后处理：

• 预防性抗生素（如青霉素）及二次雌激素注射维持激素环境

• 4-8周后开腹评估移植物体积（≥8mm³）及病理特征

2. 同种异体移植模型

用于药物筛选时避免供体-受体个体差异干扰：

• 操作要点：

• 供体鼠子宫内膜碎片经RPMI1640培养基处理后腹腔注射至受体鼠

• 受体鼠需同步激素处理（雌二醇每4天注射，共2次）

• 优势：标准化移植组织量，适合高通量药效评价

3. 诱导型模型

通过激素或药物干预模拟EMT病理环境：

• 激素诱导：

• DES（二乙基甲合资药物）联合手术，促进血管生成及炎症反应

• 雌孕激素比例失调：高剂量雌二醇+低孕酮环境

• 药物干预：

• GnRH拮抗剂（如Cetrorelix）缓释植入，诱导慢性低雌激素状态

• 亮丙瑞林微球抑制垂体-性腺轴，评估病灶wei缩效果

4. 基因工程模型

新兴技术用于机制研究：

• 荧光标记模型：CFP转基因鼠子宫内膜碎片移植，实现病灶实时追踪

• 基因敲除模型：针对VEGF、COX-2等靶点构建，但成本高且周期长

二、模型验证指标

1. 形态学评估

• 肉眼观察：移植物呈囊状隆起，内含黏液或血性液体，血管网丰富

• 体积测量：游标卡尺或光声成像（PAI）动态监测病灶大小及氧饱和度

• 组织病理学：

• H&E染色：腺体扩张、乳头状增生，腺上皮柱状化

• Masson染色：评估纤维化程度

• PAS染色：检测糖原沉积（异位内膜特征）

2. 生化与分子指标

• 激素水平：

• 血清雌二醇（E2）升高，孕酮（P4）降低，E2/P4比值失调

• 垂体GnRHR mRNA表达下调提示中枢调控异常

• 炎症与血管生成：

• IL-6、TNF-α、COX-2等促炎因子升高

• VEGF、FGF等血管生成标志物过表达

• 增殖与凋亡：

• PCNA、Ki67阳性率增加（>30%）

• Bcl-2/Bax比值失衡，Caspase-3活性降低

3. 功能学评估

• 生育影响：模型鼠妊娠丢失率升高，胚胎着床数减少
  

• 疼痛行为：机械性痛阈降低（需结合Von Frey纤维测试）

三、模型比较与适用场景

四、关键注意事项

1. 动物选择：

• 优先选用SD大鼠（性周期稳定，耐受性强）

• 术前确认动情周期（阴道涂片法），选择动情前期手术

2. 技术细节：

• 移植组织需保留基底膜以维持腺体结构

• 缝合时避免压迫血管，确保血供

3. 伦理与质量控制：

• 严格无菌操作，术后镇痛（如布洛芬混悬液）

• 设立假手术对照组（注射脂肪组织替代内膜）

4. 创新方向：

• 结合MRI或PAI实现无创监测

• 开发类器官共培养模型模拟异位微环境

五、典型应用案例

1. 药物评价：

• GnRH激动剂GenSci006显著缩小病灶体积（抑制率>60%），降低E2水平

• 中药复方（如加味没竭片）通过调控ERα/ERβ平衡抑制异位内膜增殖

2. 机制研究：

• 荧光模型揭示VEGF介导的血管新生是病灶存活关键

• 基因表达谱分析发现EMT相关通路（Wnt/β-catenin）异常激活