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Product Centertranswell实验服务是一种广泛应用于生物学研究中的实验技术,主要用于评估细胞的迁移和侵袭能力。该实验的核心组件是Transwell小室,它由一个具有通透性膜(孔径通常在0.1-12.0微米之间)的聚碳酸酯材质构成,小室被放置在一个培养板内,形成了上室和下室的结构
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transwell实验
Transwell实验利用带有微孔膜(通常为聚碳酸酯材质)的小室装置,分隔上下两层培养液,通过化学趋化因子(如血清、生长因子)诱导细胞迁移或侵袭:
迁移实验:细胞直接穿过孔径(通常5-8μm)到达下室,无需基质胶,反映基础迁移能力。
侵袭实验:需预先在膜上涂覆Matrigel基质胶(模拟细胞外基质),细胞需分泌蛋白酶(如MMPs)降解胶层后才能穿透,模拟体内侵袭过程。
基质胶包被(仅侵袭实验):
稀释Matrigel(常用1:8比例),取200μL加入上室,37℃孵育30分钟形成凝胶层。
部分实验直接使用未稀释胶(150μL),凝固时间延长至5小时。
细胞准备与接种:
消化细胞并计数,调整密度(如5×10⁴个/孔),用无血清培养基重悬后接种至上室。
下室加入含趋化因子(如20-30% FBS)的培养基,形成浓度梯度诱导迁移。
培养与固定:
孵育时间依细胞类型而定(通常24-48小时),随后取出小室,PBS清洗,甲醇固定细胞(10-30分钟)。
染色与计数:
使用结晶紫(0.4%-0.5%)染色5-20分钟,棉签擦除未迁移细胞,显微镜下计数下室或膜底面的细胞数。
肿瘤研究:评估癌细胞的转移潜能(如检测E2F1、LKB1基因沉默对舌鳞癌、肺癌细胞侵袭的影响)。
药物筛选:测试化合物对细胞迁移/侵袭的抑制效果,如miR-325-3p通过靶向PBOV1抑制肝癌细胞转移。
免疫与发育生物学:研究白细胞趋化、干细胞定向迁移等。
避免气泡:接种时需轻柔,避免气泡阻隔细胞迁移路径。
膜孔径选择:依细胞大小调整(8μm适用于肿瘤细胞,5μm用于较小细胞如白细胞)。
血清梯度控制:下室需高浓度血清(≥20%),上室用无血清培养基,确保趋化效果。
基质胶处理:稀释比例和凝固时间需优化,过厚可能阻碍细胞穿透。
细胞状态:确保细胞活性>90%,密度适中(过高易堆积,过低统计误差大)。
定量方法:直接计数(显微镜)、结晶紫溶解后测OD值,或MTT法。
统计学处理:需重复≥3次,采用t检验或ANOVA分析组间差异(如P<0.05为显著)。
传统方法可能受外泌体或间隙连接干扰,改进方案可排除此类因素(如肝素阻断外泌体摄取)。