ELISA试剂盒试验的影响因素

更新时间：2016-08-09

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　　ELISA试剂盒，即酶联免疫法。ELISA法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点，并具有操作简便、无放射性危害的优点，因而多年来广泛应用于各高校、医院、血站和科研机构的实验室中。
　　影响ELISA实验的因素：
　　我们技术人员通过几年的实验观察，认为影响ELISA实验的因素有如下三方面：
　　一、试剂盒
　　1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体（或抗原）的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA试剂盒灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性；
　　2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。
　　二、试验仪器
　　1、加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低；
　　2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。
　　三、操作
　　1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低；
　　2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体（抗原）脱落而影响实验结果的准确性；
　　3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性；
　　4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高；
　　5、抗原与抗体反应达到平衡，依赖于温度与时间。温度高于45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。
　　总之，由于ELISA试剂盒实验的影响因素较多，在实际工作中操作规范、仔细，避免和排除各种因素的影响，使之得到准确可靠的检验结果。

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