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产品简介
裸鼠皮下成瘤模型构建：裸鼠皮下成瘤模型是肿瘤研究中应用广泛的动物模型之一，主要用于肿瘤生长机制研究、药物疗效评价、基因功能验证等方向。该模型通过将人源或鼠源肿瘤细胞/组织移植至免疫缺陷裸鼠皮下，模拟肿瘤生长微环境。
| 品牌 | 其他品牌 |
|---|
品系选择：
常用品系：BALB/c nu/nu裸鼠（T细胞缺陷）、NOD-SCID（T/B/NK细胞缺陷）、NSG（NOD-SCID-IL2Rγ-/-，全免疫缺陷）。
性别与周龄：优先选择雄性裸鼠（6-8周龄，体重18-20 g），减少激素干扰。
饲养条件：SPF级环境，温度22-25℃，湿度40-70%，12小时光照/黑暗周期。
细胞株选择：
高成瘤细胞：HCT-116（结直肠癌，成瘤率100%）、SKOV3（卵巢癌）、SGC-7901（胃癌）。
争议性细胞：如Hep-G2（肝癌）需高细胞密度（1×10⁷ cells/只）接种。
细胞预处理：
传代要求：取对数生长期细胞（活力>95%），胰酶消化后离心（1000 rpm，5分钟），重悬于PBS或基质胶（Matrigel）中（体积比1:1）。
浓度调整：常规接种浓度1×10⁶~1×10⁷ cells/mL（具体依细胞株特性调整）。
注射部位：
腋下：右腋皮下（淋巴引流明确，便于观察转移）。
背部：中线两侧（避免动物抓挠）。
操作步骤：
麻醉：1%戊ba比妥钠（50 mg/kg）或异氟烷吸入麻醉。
注射：使用1 mL注射器（22-25G针头），缓慢注入0.1-0.2 mL细胞悬液（避免渗漏）。
退针后轻压注射点，防止细胞液反流。
成瘤时间：
快速成瘤型：HCT-116（7天可见结节）。
慢速成瘤型：原代细胞或低侵袭性细胞需2-4周。
监测指标：
肿瘤体积：游标卡尺测量长径（L）和短径（W），按公式V=1/2×L×W²计算。
动物状态：体重变化、活动度、肿瘤溃疡情况。
成功标准：瘤体体积≥100 mm³（通常接种后2-4周）。
生长曲线分析：绘制肿瘤体积-时间曲线，计算倍增时间（如HCT-116约3天）。
HE染色：观察肿瘤细胞异型性、核分裂象及间质浸润。
免疫组化：检测Ki-67（增殖指数）、CD31（微血管密度）等标志物。
基因表达：qPCR或Western blot验证目标基因（如PRDX4、ASAP1）在瘤体中的表达。
信号通路分析：检测PI3K/AKT、VEGF等通路关键蛋白。
小动物PET/CT：18F-FDG示踪肿瘤代谢活性。
活体荧光成像：适用于标记荧光素酶（Luc）的肿瘤细胞。
细胞预处理：
基质胶混合：增强细胞黏附与血管生成（如SKOV3联合Matrigel）。
低温操作：细胞悬液全程冰上保存，减少凋亡。
动物选择优化：
年轻裸鼠：4-6周龄代谢活跃，成瘤更快。
免疫强化品系：NSG小鼠适用于低成瘤性细胞。
| 问题类型 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 无肿瘤形成 | 细胞活力低/接种量不足 | 提高细胞浓度至1×10⁷ cells/mL，检测台盼蓝染色 |
| 肿瘤体积差异大 | 注射不均匀或渗漏 | 使用细针头（25G），退针后按压30秒 |
| 动物死亡 | 麻醉过量或感染 | 控制戊ba比妥钠剂量≤50 mg/kg，术后给予抗生素 |
原位移植模型：
皮下传代后切取瘤块（1 mm³）移植至靶器官（如胃壁），模拟转移。
基因编辑模型：
CRISPR/Cas9敲除目标基因（如KMT2D）后接种，研究基因功能。
案例：卡培他滨抑制HCT-116裸鼠瘤体生长，肿瘤体积减少60%。
评价指标：瘤重抑制率=（对照组瘤重-实验组瘤重）/对照组瘤重×100%。
案例：sh-PRDX4组瘤体体积较对照组下降50%，证实PRDX4促癌作用。
验证方法：shRNA慢病毒转染+皮下成瘤。
案例：过表达miR-449a抑制Bel-7402肝癌细胞转移，肺转移灶减少80%。
技术延伸：结合淋巴结解剖与HE染色分析转移率。
3R原则：
替代（Replacement） ：优先使用体外模型预实验。
减少（Reduction） ：每组≥5只裸鼠（统计学意义）。
优化（Refinement） ：术中麻醉+术后镇痛（布洛芬5 mg/kg）。
数据记录：详细记录接种时间、细胞批次、动物编号。
病理存档：瘤体福尔马林固定或液氮冻存，供后续分析。
裸鼠皮下成瘤模型因其操作简便、成本可控和高重复性，成为肿瘤研究的核心工具。未来发展趋势包括：
多组学整合：单细胞测序解析瘤内异质性。
动态监测技术：纳米探针联合micro-CT实现微转移灶无创检测。
人源化升级：PDX（人源肿瘤异种移植）模型替代传统CDX模型，提高临床预测性。
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