人脂肪来源的干细胞原代分离培养操作方案

具体流程如下：

1. 取临床来源人体脂肪组织称重，添加含 2% 双抗的 PBS 溶液洗涤 3 次；

2. 无菌条件下使用眼科剪，将脂肪组织剪至体积约 1mm³的细小组织块；

3. 加入5mL I型胶原酶，置于 37℃、80rpm 摇床消化 50～60 min；

4. 加入等体积wan全培养基中和胶原酶，终止消化反应；

5. 采用 70μm细胞筛过滤悬液，除去未充分消化的结缔组织与细胞团；

6. 室温条件下 1800 rpm 离心 10 min；

7. 离心后上层漂浮大量脂滴，先用吸管吸取大部分脂滴，再弃去全部上清；

8. 配制wan全培养基（DMEM/F12 + 10% 胎牛血清 FBS + 1% 双抗）重悬细胞沉淀；

9. 细胞悬液接种至培养器皿进行培养；

10. 接种 48 h 后进行换液；

11. 后续常规每周更换 2 次培养液；

12. 持续培养 7～10 d，脂肪干细胞逐步达到细胞融合状态。