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Product Center心血管相关原代分离(原代培养心肌细胞)作为一种主要的体外研究模型,被广泛应用于心血管研究之中。常用于电生理、心肌损伤修复、心肌缺血再灌注损伤机制和药物保护心肌的机制研究。我们经过长期尝试,摸索出了一些行之有效的方法,能够获得纯度高、活性好的原代新生大鼠、小鼠心肌细胞。
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原代培养心肌细胞作为一种主要的体外研究模型,被广泛应用于心血管研究之中。常用于电生理、心肌损伤修复、心肌缺血再灌注损伤机制和药物保护心肌的机制研究。我们经过长期尝试,摸索出了一些行之有效的方法,能够获得纯度高、活性好的原代新生大鼠、小鼠心肌细胞。
分离方法:
新生大鼠或小鼠心肌细胞常用II型胶原酶消化法。例如,通过剪碎心脏组织后,用0.05% II型胶原酶预消化去除血细胞,再用0.1% II型胶原酶分阶段消化(12分钟+4分钟),结合差速离心或Percoll密度梯度离心分离心肌细胞,存活率可达80%以上。成年心肌细胞则需优化酶解条件,如添加布雷他汀(Blebbistatin)以抑制收缩损伤,提高活力和电生理特性。
关键优化:
鼠龄选择:新生1-3日龄乳鼠心肌细胞增殖能力较强,分离后贴壁快、存活率高;成年心肌细胞需更精细的酶解流程。
培养基与基质:MEM培养基结合层粘连蛋白基质可维持心肌细胞形态和功能。
冻存技术:优化冷冻保存液(如含DMSO和血清)可实现66%以上的细胞回收率,且功能损伤极小。