原位杂交

原位杂交

原位杂交反应（以DIG-cDNA探针为例）：

1、切片常规脱蜡至水，脱蜡前，将组织切片置于60℃恒温箱中烘烤60min；

2、30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合，室温10min以灭活内源性酶，蒸馏水洗3次；

3、暴露mRNA核酸片段，切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶，37℃消化30min，PBS洗5min X3，蒸馏水洗1次；

4、预杂交，湿盒准备——干的杂交盒底部加20%甘油以保持湿度。按每张20uL加杂交液。恒温箱40℃ 2h，吸取多余液体；

5、杂交，按每张切片20uL探针杂交液，加在切片上。将盖玻片盖在切片上，蜡蟆封盖，恒温箱42℃杂交；

6、杂交后洗涤，去除蜡膜，揭掉盖玻片，37℃ 2XSSC洗5min X2；37℃ 0.5XSSC洗15min X1；37℃ 0.2XSSC洗15min X1；

7、滴加封闭液，37℃ 30min；

8、滴加生物素化鼠抗地-高-辛，37℃ 60min，PBS洗5min X4；

9、滴加SABC，37℃ 30min，PBS洗5min X3；

10、滴加生物素化过氧化酶，37℃ 30min，PBS洗5min X4；

11、DAB显色，使用DAB显色试剂盒，显色10min左右，显色后充分水洗；

12、苏木素复染，水洗返蓝；

13、酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片；

14，显微镜下观察拍照。

原位杂交

客户提供:

1. 组织样本材料要新鲜，组织离体后应立即投入固定液（10％中性甲醛、4％多聚甲醛，）中；

2. 细胞样本离心后弃去上清液加入3%戊二醛固定液；

3. 石蜡切片，冰冻切片以及细胞爬片，涂片等请按照温度要求运输、储存。

提交的产品和资料:

1. 杂交后的切片；

2. 每张切片提供一张照片；

3. 实验报告