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原位杂交

原位杂交:能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其他成分的影响,因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内DNA或RNA研究更为方便;同时由于原位杂交不需要从组织中提取核酸,对于组织中含量极低的靶序列有*的敏感性,并可完整地保持组织与细胞的形态,更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。

  • 更新时间:2023-08-28
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原位杂交

原位杂交反应(以DIG-cDNA探针为例):

1、切片常规脱蜡至水,脱蜡前,将组织切片置于60℃恒温箱中烘烤60min;

2、30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温10min以灭活内源性酶,蒸馏水洗3次;

3、暴露mRNA核酸片段,切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶,37℃消化30min,PBS洗5min X3,蒸馏水洗1次;

4、预杂交,湿盒准备——干的杂交盒底部加20%甘油以保持湿度。按每张20uL加杂交液。恒温箱40℃ 2h,吸取多余液体;

5、杂交,按每张切片20uL探针杂交液,加在切片上。将盖玻片盖在切片上,蜡蟆封盖,恒温箱42℃杂交;

6、杂交后洗涤,去除蜡膜,揭掉盖玻片,37℃ 2XSSC洗5min X2;37℃ 0.5XSSC洗15min X1;37℃ 0.2XSSC洗15min X1;

7、滴加封闭液,37℃ 30min;

8、滴加生物素化鼠抗地-高-辛,37℃ 60min,PBS洗5min X4;

9、滴加SABC,37℃ 30min,PBS洗5min X3;

10、滴加生物素化过氧化酶,37℃ 30min,PBS洗5min X4;

11、DAB显色,使用DAB显色试剂盒,显色10min左右,显色后充分水洗;

12、苏木素复染,水洗返蓝;

13、酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片;

14,显微镜下观察拍照。

原位杂交

客户提供:

1. 组织样本材料要新鲜,组织离体后应立即投入固定液(10%中性甲醛、4%多聚甲醛,)中;

2. 细胞样本离心后弃去上清液加入3%戊二醛固定液;

3. 石蜡切片,冰冻切片以及细胞爬片,涂片等请按照温度要求运输、储存。

提交的产品和资料:

1. 杂交后的切片;

2. 每张切片提供一张照片;

3. 实验报告

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